利用蛋白质组学技术鉴定大豆籽粒贮藏蛋白亚基 A1aB1b缺失体

文档编号:SP038  文档字数:7971,页数:17  附任务书,开题报告,答辩PPT

摘  要  在SDS-PAGE筛选到A1aB1b或A1bB2或A2B1a亚基缺失的基础上，运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE）分析大豆贮藏亚基正常品种南农大黄豆和亚基缺失品种桂阳紫金豆种子总蛋白的蛋白质组。差异蛋白质组学显示，等电点和分子量分别约为x1和y1、x2和y2、x3和y3的蛋白质点在正常品种种子中表达而在缺失品种中未表达。对这3个蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（Matrix-assisted laser-desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱（Peptide Mass Fingerprint，PMF），经Mascot：Peptide Mass Fingerprint中NCBI数据库查询后，鉴定这3个蛋白质均为Soybean Proglycinin A1ab1b Homotrimer，表明桂阳紫金豆种子贮藏蛋白缺少A1ab1b亚基。
     关键词  蛋白质组学； 鉴定； 大豆贮藏蛋白； A1aB1b亚基； 缺失

Abstract:This thesis focuses on applying 2-DE to analyze the proteome of the seed protein of soybean varieties “Nannongdahuangdou” which contains normal subunits and “Guiyangzijindou” which lacks subunits on the basis of SDS-PAGE selection and the absence of the A1aB1b or A1bB2 or A2B1a –subunits. Three protein spots with pIx1 , Mr y1kDa; pIx2 , Mr y2kDa; pIx3, Mr y3 kDa respectively show normal expression in the seed protein of the variety “Nannongdahuangdou”, while no expression in the mutant line. After being tested the PMF with Matrix-assisted laser-desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS and surveyed by the NCBI state base of Mascot：Peptide Mass Fingerprint, these three proteins were all identified as Soybean Proglycinin A1ab1b Homotrimer. The results indicated that the variety “Guiyangzijindou” lacks A1ab1b-sununits.
Keywords: Proteomics； identification； soybean storage protein； A1ab1b-sununits； absence

目  录

1 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.2 主要试剂 3
1.3 主要仪器设备 3
1.4 方法 3
1.4.1 大豆种子贮藏蛋白的提取和SDS-PAGE按第二章所述方法进行 3
1.4.2 大豆种子蛋白2-DE样品的制备 3
1.4.3 蛋白质浓度测定 4
1.4.4 大豆种子总蛋白的双向电泳 4
1.4.4.1 第一向固相pH梯度等电聚焦电泳（IPG-IEF） 4
1.4.4.2 第二向SDS-PAGE 5
1.4.5考马斯亮蓝染色 5
1.4.6 2-DE图像分析 5
1.4.7 取点 5
1.4.8 考染蛋白点的胶内酶解 5
1.4.9 差异蛋白质点的质谱分析 5
1.4.10 MALDI-TOF-MS肽质指纹分析 6
1.4.11 质谱数据的数据库搜索 6
2 结果与分析 6
2.1 SDS-PAGE图谱分析 6
2.2 2-DE图谱分析 7
2.3 MALDI-TOF-MS分析 8
2.4 数据库搜索比对结果 10
3 讨论 11
3.1 大豆种子总蛋白的双向电泳 11
3.2 蛋白质组学技术在大豆蛋白种子表达研究上的应用 12
3.3 大豆种子蛋白A1aB1b亚基缺失在功能特性上的意义 14
参考文献 15

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