粗毛栓菌漆酶的分离与纯化

文档编号:SP054  文档字数:4579,页数:07,附任务书,开题报告,中期检查,答辩记录

粗毛栓菌漆酶的分离与纯化
摘要：将粗毛栓菌接种在含有麦草粉的培养基中培养25d，过滤得粗酶液，尔后经超滤、盐析、离心、透析、浓缩，将透析液上样于Q-Sepharose F. F.层析柱，获得具有漆酶活性的组分,并测定上柱前、后漆酶的酶活力，以及溶液中的蛋白含量，从而测定漆酶的回收率和纯化度。
关键词： 粗毛栓菌；漆酶；离子交换层析

 Sepration and Purification of Laccases in Trametes gallica
Abstract: Trametes gallica was cultivated in wheat powder for 25 days. The crude enzyme was ultrafiltrated, salted out , centrifugaled, dialyzed and concentration was applied to Q-Sepharose F.F. ion exchange column. The effluent with laccase acticity was obtained, Determine the column before and after the laccase enzyme activity and protein content of the solution to determine the recovery rate and purification degree of laccase.
Key words:  Trametes gallica； laccase； ion exchange chromatography

目　录

 摘要 …………………………………………………………………………………………1
关键词 ………………………………………………………………………………………1
Abstract ……………………………………………………………………………………1
Key words ……………………………………………………………………………………1
引言 …………………………………………………………………………………………1
1 材料与方法 ………………………………………………………………………………1
1.1 材料 ……………………………………………………………………………………1
1.1.1 菌种 …………………………………………………………………………………1
1.1.2 高产漆酶培养基 ……………………………………………………………………2
1.1.3 仪器 …………………………………………………………………………………2
1.1.4 试剂 …………………………………………………………………………………2
1.2 方法 ……………………………………………………………………………………2
1.2.1 粗酶的制作 …………………………………………………………………………2
1.2.2 超滤 …………………………………………………………………………………2
1.2.3 硫酸铵盐析 …………………………………………………………………………2
1.2.4 离心 …………………………………………………………………………………2
 1.2.5 透析 …………………………………………………………………………………2
 1.2.6 酶活力和蛋白含量的测定 …………………………………………………………2
 1.2.6.1 酶活力的测定 ……………………………………………………………………2
 1.2.6.2 酶蛋白含量的测定 ………………………………………………………………3
 1.2.7 酶液浓缩 ……………………………………………………………………………3
 1.2.8 离子交换柱层析 ……………………………………………………………………3
 1.2.9 酶活力和蛋白含量的测定 …………………………………………………………3
 1.2.10 酶回收率和纯化度的计算  ………………………………………………………3
1.2.11 漆酶的纯化与鉴定 …………………………………………………………………3
2 分析和讨论 ………………………………………………………………………………3
2.1 漆酶的诱导 ……………………………………………………………………………3
2.2 酶液总蛋白含量 ………………………………………………………………………3
2.2.1 牛血清蛋白标准曲线 ………………………………………………………………3
2.2.2 层析前后蛋白含量 …………………………………………………………………4
2.3 离子交换层析结果  ……………………………………………………………………4
2.4 酶的纯化度和回收率 …………………………………………………………………5
参考文献 ……………………………………………………………………………………6
致谢 …………………………………………………………………………………………6

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