尿酸酶制剂在鸡体内的应用研究

文档编号:SP012  文档字数:32453,页数:58

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第一部分 前言 2
1尿酸酶的研究简史[3，4] 3
2核酸疫苗 4
2.1质粒载体的生物学特征 5
2.2 pET28a和pcDNA3.1-Uc的结构特征 5
3酶类制剂 7
3.1酶纯化方法[10] 8
3.2酶含量的测定 9
3.3尿酸酶活性的测定方法[12] 9
3.3.1终止反应法（Stopped Method） 9
3.3.2连续反应法（Continuous Method） 10
4高尿酸血症动物模型的研究[14] 10
4.1建立高尿酸酶血症动物模型的基本原理 11
4.2动物的选择 12
4.3 鸡痛风病模型的研制 13
5 实验目的和意义 15
第二部分 尿酸酶的核酸（pcDNA3.1-UC质粒）制剂在鸡体内的表达研究 15
1材料与方法 15
1.1 材料 15
1.1.1 菌种和质粒 15
1.1.2试剂和溶液配置 15
1.1.3 仪器 19
1.2实验方法 20
1.2.1菌体的活化 20
1.2.2质粒pcDNA3.1-UC大量制备 20
1.2.3质粒pcDNA3.1-UC的琼脂糖凝胶电泳 21
1.2.4经RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC质粒的琼脂糖凝胶电泳 21
1.2.5离子交换层析纯化pcDNA3.1-UC质粒 21
1.2.6 PCR鉴定纯化质粒为pcDNA3.1-UC 23
1.2.7 pcDNA3.1-UC质粒在鸡体内的表达的检测 24
2结果与分析 27
2.1 电泳检测提取的pcDNA3.1-UC质粒 27
2.2经RNA酶消化后的pcDNA3.1-UC质粒的琼脂糖凝胶电泳检测 27
2.3 DEAE离子交换层析曲线 28
2.4 纯化质粒为pcDNA3.1-UC PCR鉴定 29
2.5 pcDNA3.1-UC质粒在鸡体内的表达分析 29
2.5.1质粒DNA溶液浓度的测定实验结果 29
2.5.2 鸡血清尿酸含量测定试验结果: 30
3讨论 34
第三部分 尿酸酶制剂在鸡体内的应用研究 34
1材料与方法 34
1.1材料 34
1.1.1菌种 34
1.1.2 试剂及其配置 34
1.1.3 仪器 37
1.2 实验方法 38
1.2.1 酶活性的检测 38
1.2.2菌体的培养及诱导表达 39
1.2.3表达产物的提取 39
1.2.4硫酸铵分段盐析 40
1.2.5 酶蛋白浓缩 40
1.2.6分子筛层析分离BL21/ pET28a-UC表达产物 40
1.2.7 鸡血清尿酸含量测定 43
1.2.8 ELISA实验检测鸡尿酸酶抗体 44
2 结果与分析 46
2.1分子筛（sephadex-200）纯化BL21/ pET28a-UC表达产物的结果 46
2.2尿酸酶溶液中酶活性测定的实验结果 46
2.3 酶蛋白的DEAE离子交换曲线及结果 47
2.4尿酸酶溶液的浓度测定实验结果 48
2.5已纯化的尿酸酶SDS PAGE结果 48
2.6 鸡尿酸含量测定试验结果 49
2.7 ELISA实验结果 52
3讨论 53
第四部分 创新点与总结 53
参考文献 54
致谢 58

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