含黄芪制剂中皂苷类化合物的HPLC测定方法的概述 (4)(二)

4 HPLC法测定黄芪制剂的应用实例

在中药检测中,由于部分指标成分或有效成分仅有紫外末端吸收或无紫外吸收,检测时受到了限制,又由于某些仅有紫外末端吸收或无紫外吸收的有效成分在中药复方制剂中常作为君药的有效成分被指定为含量测定项的必检指标成分。例如:人参中的人参皂苷,黄芪中的黄芪甲苷等。由于使用HPLC2UV或其他检测方法的前处理步骤多,重现性较差,排除干扰较困难,使检测工作者在制定质量标准中感到棘手。而ELSD恰恰在这方面有着其独到的优越性和广泛的应用前景,相信在不远的将来,ELSD定会更广泛地用于中药材和中药复方制剂检测的各个方面。

HPLC法测定黄芪制剂皂苷成分含量的应用实例还有很多，多数的研究均是在普通HPLC法上加以改进，对其进行升级达到能够对黄芪皂苷这类大分子物质的定位和定量

4.1含黄芪制剂中黄芪甲苷的含量测定

摘 要:该文旨在建立某黄芪制剂中黄芪甲苷的高效液相色谱法测定含量。所采用方法：采用蒸发光散射检测器（ELSD）以黄芪甲苷为对照品对黄芪中黄芪甲苷进行HPLC-分析，色谱柱为C18柱，甲醇－水（75∶25）为流动相，流速1.0 mL/min，柱温40 ℃；漂移管温度83.8 ℃，载气（空气）流速2.0 L/min。结果:所建立的含量测定方法结果准确，便捷，专属性强，无干扰,可用于控制该制剂的质量。

关键词:黄芪甲苷 HPLC-ELSD 含量测定含黄芪制剂

中药黄芪含有黄芪甲苷、黄芪多糖等多种成份，其中黄芪甲苷为主要活性成分，具有降压、保护心肌 、减轻心肌缺 血和增强免疫力等作用［1-2］ 。该研究建立某黄芪制剂（六类新药，研发中。主要含黄芪、砂仁等）中黄芪甲苷的含量测定方法，为该制剂的质量控制提供方案。

1仪器、试药与样品

1.1 仪器

A g i l e n t 1 1 0 0 高 效 液 相 色 谱 议 ；

A l l t e c h 2 0 0 0 蒸 发 光 散 射 检 测 器 ； 

AB250D十万分之一电子天平。

    1.2 试药

黄芪甲苷标 准品（中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯和分析纯；其余所

用试剂均为分析纯；黄芪等药材购自广州致信药业有限公司。

    1.3 样品的制备

 按制剂处方称 取黄芪30g和其他药材。将除黄芪外的其他药材置圆底烧瓶中，加12倍量水，接挥发油提取器，提取1h，所得挥发油弃去，水提液过滤，保留待用；药渣加入黄芪，加8倍量水，加热回流提取1h，所得水提液过滤，保留待用；再加6倍量水,加热回流提取0.5h,水提液过滤，与前两次水提液合并，浓缩至每毫升药液中含药材1g，搅拌加入95%的乙醇至含醇 量为60%，放置过夜，滤取滤液，即样品液。

2 方法与结果

    2.1 溶液的制备

对照品溶液的制备 2.1.1

精密称取干燥至恒重的黄芪甲苷对照品15 mg置100 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1 mL中含黄芪甲苷30 μg）

    2.1.2 供试品溶液的制备

精密称取样品液3 g，置蒸发皿中水浴上蒸干，加水20 mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次10 mL，取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次10 mL，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

    2.1.3 阴性对照溶液的制备

用缺黄芪药材的处方按1.3项的方法制得阴性样品。精密称取阴性样品液3 g，

按2.1.2项的方法制备，即得。

2.2 色谱条件的选择

色谱柱DiscoverC18柱（25 cm×4.6 mm, 5  μm），流 动 相甲醇－水（75：2 5），流 速1.0 mL/min，柱温40℃；ELSD：漂移管温度83.8℃，载气（空气）流速2.0 L/min，撞击器关闭。在上述色谱条件下，黄芪甲苷的保留时间合适，大约在8.7 min且峰形较好；在与对照品对应的位置上，供试品溶液中也有一色谱峰，且前后没有其它组分干扰，达到基线分离；而阴性对照溶液在该位置上没有色谱峰

2.3 线性关系考察