葛根散出自金·张子和《儒门事亲》卷十二,由甘草、干葛花、葛根、缩砂仁、贯众各等分组成,主治饮酒过度、酒毒内蕴,是防治酒伤的常用方剂。石金敏等【5】采用高效液相色谱法同时测定葛根散中葛根素、大豆苷的含量。使用色谱柱为Inertsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液(10:90)为流动相,葛根素、大豆苷检测波长为250nm,流速1.00 ml/min。结果:葛根素、大豆苷质量浓度与峰面积呈良好线性关系,葛根素和大豆苷的线性范围分别是1.4~90μg/ml(r=1.0000),2.5~160μg/ml(r=1.0000),加样回收率分别为97.57%(RSD=1.75%)和99.64%(RSD=1.96%)。结论:该方法快速、准确,适用于葛根散中葛根素和大豆苷的含量测定。
(三)HPLC法测定复方葛根片中葛根素的含量
复方葛根片是由葛根、茵陈、丹参、延胡索组成,具有活血化瘀、和气镇痛、生津养心的作用,主要用于治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死。王利娜、范莉莉、张正臣等【6】采用HPLC法测定复方葛根片中葛根素的含量,用色谱柱为Inertsil C18柱(150 L×4.6),甲醇-0.1%磷酸水溶液(25:75)为流动相,检测波长为250 nm,流速1.00ml/min,进样量10μl,结果:葛根素浓度12.6~75.6μg/ml范围内峰面积与与浓度呈良好线性关系,(r=0.9997)。结论:该方法快简单,测定结果准确可靠,重复性好,不受其他成分干扰,可用于复方葛根片的质量控制。
(四)HPLC法测定测定舒筋活血颗粒中葛根素的含量
陈昭等【7】建立舒筋活血颗粒的质量评价方法,采用UHPLC-MS-MS( LC-MS)法,对舒筋活血颗粒中2种活性成分葛根素、黄芪甲苷进行同时测定,采用Agilent poroshell C18色谱柱(2.1 mm×100 mm, 2.7 μm),以0.2%甲酸-乙腈(体积比40 :60)为流动相,4min内等度洗脱,共测定10批次供试品。结果:葛根素、黄芪甲苷在4min内全部洗脱,2种成分在10~1000 ng/mL下线性关系良好( r2=0.9992和0.9994),已测定的10批次供试品中葛根素的平均质量分数为3.42 mg/g,RSD为8.12%;黄芪甲苷的平均质量分数为0.028 mg/g,RSD为19.63%。结论:本方法准确、快速、高效,为以该制剂为代表的复方中药制剂的质量评价提供了参考。
(五)HPLC法测定复方感冒清热颗粒中葛根素的含量
复方感冒清热颗粒由荆芥穗、葛根、防风、白芷、薄荷、柴胡、桔梗、苦杏仁、紫苏叶等组成,主要用于用于风寒感冒、头痛发热、恶寒身痛、鼻流清涕、咳嗽咽干等。张弘【8】建立反相高效液相色谱法测定复方感冒清热颗粒中葛根素的含量。方法:采用奥泰公司C18色谱柱(218 mm×4.6mm,5μm),甲醇-水(13:87),检测波长为250nm,流速为1.0ml/min,柱温为30℃。葛根素在9.6~48.0μg/ml范围内呈良好的线性关系。葛根素平均回收率分别为99.5%。结论:本法简便、准确,可用于复方感冒清热颗粒中葛根素的含量测定。
(六)HPLC法测定复方丹芎滴丸中葛根素的含量
复方丹芎滴丸由丹参、葛根、川芎、冰片等多味中药组成,具有活血通脉之功效,主要用于缺血性心脑血管疾病,脑动脉硬化、脑血栓、脑缺血、冠心病、心绞痛等的治疗。贾永艳等【9】用高效液相色谱法测定复方丹芎滴丸中葛根素的含量,使用色谱柱为C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水(25:75)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长:250nm。结果表明,葛根素在0.076 2~1.524 mg范围内与峰面积呈良好的线性关系,R2=0.9999,平均回收率95.6%,RSD=1.51% (n=6)。说明该测定方法稳定,重现性好,结果准确可靠,可用于复方丹芎滴丸的质量控制。
(七)HPLC法测定回神颗粒中葛根素的含量
回神颗粒由丹参、川芎、葛根、灵芝、五味子等中药组成,主要用于治疗缺血性脑损伤、血管性痴呆等脑神经血管类疾病的辅助治疗。杨金颖、翁蓓、孙芳芳等【10】建立HPLC法测定回神颗粒中葛根素的含量。方法:采用WondaSil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(25:75),检测波长为250 nm,流速:1.0 ml/min,进样量10μl。结果:葛根素在8.12~162.43μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为99.34%(RSD为1.49%)。结
论:HPLC法测定葛根素的含量简便快捷,专属性强,可有效控制回神颗粒的质量。
(八)HPLC法测定眩晕停胶囊中葛根素的含量
眩晕停胶囊是由葛根、白芍等多味中药组成的复方制剂,主要用于治疗眩晕、椎动脉供血不足及四肢麻木等症状。邬璟等【11】建立眩晕停胶囊中葛根素的鉴别与含量测定方法。方法:采用薄层色谱法对眩晕停胶囊中葛根素进行鉴别,并采用高效液相色谱法进行含量测定。结果:眩晕停胶囊中葛根素的TLC(薄层色谱法)鉴别特征明显,专属性强;HPLC含量测定法线性范围为20.00~100.00μg/mL(R2=0.9999);平均回收率(n=6)为98.23 %(RSD=1.38%)。结论:本实验建立的眩晕停胶囊中葛根素的鉴别与含量测定方法简便稳定,适用于眩晕停胶囊的质量控制。
(九)HPLC法测定十二味降糖胶囊中葛根素的含量
十二味降糖胶囊是由黄芪、葛根、山药、五味子、地黄、玄参、天花粉等十二味中药组成,具有滋肾养阴、清热燥湿、生津止渴之功效,主要用于治疗气阴两虚二型糖尿病。李松宾、王艳丽【12】采用高效液相色谱法(HPLC)测定十二味降糖胶囊中葛根素的含量,为该制剂的质量控制提供依据。方法:采用ODS-C18色谱柱5μm(4.6 mm×250 mm),流动相:甲醇-水(25:75),流速:1.0 ml/min,检测波长250nm,检测十二味降糖胶囊中葛根素的含量,并与葛根素的对照品比较。结果在0.4028~6.0420μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为99.88%,相对标准偏差RSD=0.1%(n=9)。十二味降糖胶囊3个批次中葛根素的含量分别为2.6247 mg/g、2.6587 mg/g、2.6371 mg/g。结论:HPLC法测定十二味降糖胶囊中葛根素的含量,简便、准确、稳定,可用于该制剂葛根素的质量控制。
(十)HPLC法测定四味宁心胶囊中葛根素的含量
四味宁心胶囊由葛根、丹参、黄精、黄连四味中药组成,具有祛风、滋阴、通络、活血化瘀制功效。张旋、张媛媛、辛玲歌【13】采用HPLC法对四味宁心胶囊中的葛根素进行含量测定,观察四味宁心胶囊对抗氯仿致小鼠心率失常及其对兔脑循环和脑代谢的影响。结果:四味宁心胶囊在0.5~2.0μg范围内呈良好的线性关系,葛根素平均回收率为99.29%(RSD%=0.56%),四味宁心胶囊能明显改善氯仿致小鼠心率失常,降低小鼠室颤率及明显增加兔脑血流量,并显著提高兔脑耗氧量和葡萄糖摄取量,且呈剂量依赖性。结论:本法操作简便,重复性好,结果准确、快速,可作为四味宁心胶囊的质量控制方法。
(十一)HPLC法测定葛黄丸中葛根素的含量
葛黄丸由葛根和黄连二药组成,主要用于饮酒过多、内有积热涌盛、呕血不止、或至垂死者。姚敦武、潘勇、刘丰贤【14】建立葛黄丸中葛根素的含量测定方法。方法:高效液相色谱法,色谱柱为依利特Hypersil-ODS(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为甲醇:水(25:75)溶液,流速为1.0 mL/min,检测波长为250 nm,柱温为室温。结果:葛根素的回归方程为Y=9266039X+364140(R2=0.9998),线性范围为0.0428~1.8839μg,精密度试验RSD为0.18%,24h内稳定性试验RSD为0.2%,加样回收率试验RSD为0.54%。结论:本方法简便可行、稳定可靠、且重现性好,为葛黄丸的质量评价提供了依据。
四、结论
综上所述,葛根及其制剂中的黄酮类化合物含量的HPLC测定方法都是采用《中国药典》的高效液相色谱法进行测定,测定的黄酮类化合物以葛根素的研究最多。测定过程中样品处理方法各异,所用流动相也各有不同,但研究结果基本一致:采用HPLC法测定葛根及其制剂中黄酮类化合物含量,分析精度高、简便可行、准确可靠,可用于葛根及其制剂的质量控制。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].中国医药科技出版社.2015:333.
[2]傅舒等.几种葛根主要化学成分的测定与比较分析.西南农业学报.2014, 27(3):1054-1057.
[3]吴婷妮.黄酮类化合物的含量测定方法[J].中外医疗.2014,(24):197-198.
[4]程京艳等.RP-HPLC法测定葛根药对中四种黄酮类药效组分的含量[C].2015中西医结合北京论坛论文集.2015:696-698.
[5]石金敏等.高效液相色谱法同时测定葛根散中葛根素、大豆苷的含量[J].
食品与药品.2019,21(2):124-126.
[6]王利娜,范莉莉,张正臣.HPLC法测定复方葛根片中葛根素的含量[J].实用医药杂志.2014,31(3):241-242.
[7]陈昭等.UHPLC-MS-MS法同时测定舒筋活血颗粒中葛根素和黄芪甲苷的含量[J].广东药科大学学报,2018,34(3):303-306.
[8]张弘.复方感冒清热颗粒含量测定[J].中国科技投资.2018, (24):255.
[9]贾永艳等.HPLC法测定复方丹芎滴丸中葛根素的含量[J]. 河南科学.2012,30(8):1036-1038.
[10]杨金颖,翁蓓,孙芳芳.HPLC法测定回神颗粒中葛根素的含量[J].天津药学.2018,30(2):20-22.
[11]邬璟等.眩晕停胶囊中葛根素的鉴别与含量测定方法.[J].包头医学院学报.2018,34(2):124-126.
[12]李松宾,王艳丽.高效液相色谱法测定十二味降糖胶囊中葛根素的含量[J].河南医学高等专科学校学报.2017,29(5):502-504.
[13]张旋,张媛媛,辛玲歌.HPLC法测定四味宁心胶囊中葛根素的含量及药效学研究[J].中医药导报.2017,23(3):66-68.
[14]姚敦武,潘勇,刘丰贤.葛黄丸中葛根素的含量测定[J].湖南师范大学学报(医学版).2019,16(3):187-188.