山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (9)(二)

山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (9)(二) 山楂中黄酮类化合物的测定方法概述

2.3山楂黄酮保护肝脏

山楂黄酮类化合物对各类原因导致的肝细胞损伤具有良好的保护作用，特别是其中的金丝桃苷可有效改善肝功能。潘莹等[[[]潘莹,张林丽.大果山楂黄酮提取物对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的保护作用[J].时珍国医国药, 2008, 19(2): 318-319. ]]研究提示：对于扑热息痛和硫代乙酰胺造成的急性肝损伤小鼠，大果山楂黄酮提取物能有效降低其血清ALT、AST、ALP的活性，并能增加肝糖原元、改善肝脏细胞组织病理损伤。裴小川[[[]裴小川, 刘月, 罗娜娜,等. 山楂叶总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用[J]. 承德医学院学报, 2012, 29(3):323-325.]]等通过白酒灌胃造成小鼠急性酒精性肝损伤，研究山楂叶总黄酮对急性酒精性肝损伤的保护作用及其机制。结果提示山楂叶总黄酮降低小鼠血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶 活性，改善由酒精引起的肝组织脂肪样变和炎症坏死，升高肝组织 还原型谷胱甘肽的含量、降低MDA的含量。表明山楂叶总黄酮同样可通过清除自由基，抗脂质过氧化等途径改善急性酒精性肝损伤。 

2.4山楂黄酮抗肿瘤作用

最近的研究还发现山楂黄酮可以抑制肿瘤细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡。唐世英[[[]唐世英, 胡桂才, 杨凤国,等. 山楂叶总黄酮对人类单核肿瘤细胞增殖的影响[J]. 中药新药与临床药理, 2010, 21(3):269-270.]]等研究发现山楂叶总黄酮对人类单核肿瘤细胞U937增殖有显著抑制作用，高浓度的山楂叶黄酮（≥200mg/L）对U937细胞可能具有毒性。张妍等[[[]张妍,李厚伟,孙建平等.山楂果总黄酮的提取分离及体外抗肿瘤活性[J].中草药, 2004, 35(7): 787-789. ]]通过对喉癌细胞Hep-2细胞株的研究发现：山楂果总黄酮对正常细胞的生长无明显影响，但对肿瘤细胞的生长却有显著抑制作用。共聚焦实验结果显示山楂果总黄酮使肿瘤细胞DNA含量明显降低，表明山楂果总黄酮是通过抑制肿瘤细胞DNA的生物合成，从而阻止瘤细胞的分裂繁殖。

此外山楂中黄酮类化合物还具有对缺血及再灌注损伤的保护、防止动脉粥样硬化、保护肾脏等多方面的作用。

3黄酮类化合物常用测定方法简介

山楂中黄酮类化合物常用测定方法包括：分光光度法、纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)等多种方法。

3.1 分光光度法

分光光度法的基本原理是先用某一标准品（如芦丁）与硝酸铝络合显色，全波段扫描在某一波长处出现最大吸收峰，测定其吸光度。再用同样的方法在硝酸铝体系中加入待检测样品，测定吸光度，并以此来计算含量。

3.2 纸色谱法

以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。因纸色谱用于黄酮类化合物的分析选择性较差，一般作为定性分析。

3.3薄层色谱法

薄层色谱，或称薄层层析(thin—layer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法，从50年代发展起来至今，仍被广泛采用。此方法设备要求相对不高，操作性强，分离速度快。但分辨率和重现性较HPLC和气相色谱法差[[[]张岩, 曹国杰, 张燕,等. 黄酮类化合物的提取以及检测方法的研究进展[J]. 食品研究与开发, 2008, 29(1):154-158.]]。

3.4气相色谱法

在气相色谱分析法中，一定量（已知量）的气体或液体分析物被注入到柱一端的进样口中（通常使用微量进样器，也可以使用固相微萃取纤维（solid phase microextraction fibres）或气源切换装置。当分析物在载气带动下通过色谱柱时，分析物的分子会受到柱壁或柱中填料的吸附，使通过柱的速度降低。分子通过色谱柱的速率取决于吸附的强度，它由被分析物分子的种类与固定相的类型决定。由于每一种类型的分子都有自己的通过速率，分析物中的各种不同组分就会在不同的时间（保留时间）到达柱的末端，从而得到分离。检测器用于检测柱的流出流，从而确定每一个组分到达色谱柱末端的时间以及每一个组分的含量。该方法具有样品消耗少，灵敏度高，选择性强，特异性高的特点。但操作步骤相对复杂，且耗时长，对仪器要求高。

3.5 HPLC法

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。  液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法。与传统经典液相色谱相比，HPLC具有分析速度快、分辨率高，灵敏度高，柱子可反复使用等优点。

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