葛根芩连片的含量测定研究进展(二)

    黄芩具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎的功效。用于湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。其含量一般以黄芩苷作为定量指标，本品每片含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于2.5mg。

刘姝晨【4】等间接竞争ELISA法测定不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量，目的用所建立的黄芩苷间接竞争酶联免疫分析(ELISA)法检测不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量差异。方法利用黄芩苷单克隆抗体,通过考察线性关系、精密度、加样回收率等方法学指标,建立黄芩苷的间接竞争ELISA法,并用所建立的方法测定7个不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量。结果建立的黄芩苷间接竞争ELISA法的线性范围为16.157~1 280 mg/L,板间精密度RSD≤9.0%,板内精密度RSD≤5.1%,平均回收率为107.1%(RSD=4.9%)。7个厂家生产的葛根芩连片中黄芩苷含量从4.45 mg/片到13.41 mg/片不等。

王小龙. 【5】等高效液相色谱法测定葛根芩连片中黄芩苷的含量，采用高效液相色谱法,检测波长276nm。结果:该方法线性范围0.16～1.88μg(r=0.9998),平均回收率为98.71％

（三）葛根芩连片中盐酸小檗碱含量测定

黄连具有清热燥湿，泻火解毒的功效。用于湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，心悸不宁，血热吐衄，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮；外治湿疹，湿疮，耳道流脓。其含量一般以盐酸小檗碱作为定量指标。本品每片含黄连以盐酸小檗碱（C20H17NO4•HCl）计，不得少于2.7mg。

江汉美【6】等反相高效液相色谱法测定葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量。目的建立RP-HPLC法测定葛根芩连片中盐酸小檗碱含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法,用AgilentZORBAX SB-C18柱(4.6×250mm,5μm),以乙腈-0.05mol/L三乙胺溶液(用磷酸调节pH至3.0)(25∶75)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为347nm,柱温为室温。结果 RP-HPLC法测定方中盐酸小檗碱的含量在0.16-0.80μg范围内线形关系良好,r=0.9993,平均加样回收率为97.0%,RSD=1.3%。 

吴永芹【7】等HPLC法测定葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量，方法色谱柱:Diamonsil C18,流动相:乙腈-5mmol.L-1十二烷基硫酸钠溶液(冰乙酸调pH 4.0)(52∶48),流速:1.0mL.min-1,检测波长:348nm。结果盐酸小檗碱在0.1008~2.52μg范围内线性关系良好(r=1.000);平均加样回收率(n=9)为101.2%。

（四）葛根芩连片中多成分含量测定的最新研究  

 朱雪妍【8】等建立葛根芩连片中可能掺入的染色剂含量测定方法,并采用LC-MS/MS方法进行专属性确证。方法:采用HPLC法测定染色剂含量,使用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.05 mol·L-1乙酸铵溶液(含0.5%冰乙酸)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长为420 nm和500 nm,柱温35℃。用LC-MS/MS进行确证,以乙腈-0.01 mol·L-1乙酸铵溶液为流动相,梯度洗脱;离子源为电喷雾电离源(ESI),扫描模式为多反应监测(MRM)。结果:建立了HPLC法检测葛根芩连片中可能含有的10种染色剂含量的方法。方法学验证结果表明,柠檬黄、胭脂红、日落黄、亮黄、酸性红73、甲基橙、金橙Ⅱ、金胺O、赤藓红、碱性橙Ⅱ的线性范围分别为1.498 6~49.955 0、0.672 7~22.423 5、1.497 8~49.925 0、0.223 5~7.451 6、0.447 0~14.900 0、0.398 0~13.267 8、0.497 0~16.566 7、0.190 6~6.353 2、0.695 3~23.176 4和0.119 3~3.977 6μg;加样回收率(n=6)分别为97.2%(RSD=0.86%)、99.1%(RSD=0.48%)、98.6%(RSD=0.86%)、101.0%(RSD=1.2%)、98.2%(RSD=0.89%)、98.3%(RSD=1.0%)、97.5%(RSD=0.63%)、96.3%(RSD=0.40%)、97.8%(RSD=1.0%)和96.3%(RSD=0.96%)。在对11个厂家123批样品的检验中,有5个厂家33批样品检出金胺O,检出率为26.8%,含量在0.013~83.51·g·g-1之间,其中1批样品同时检出金胺O和碱性橙Ⅱ。用LC-MS/MS进行专属验证,33批出现HPLC阳性峰样品均检出相应的金胺O和碱性橙Ⅱ。

李丽莉【9】等葛根芩连片多成分含量测定的研究，目的:建立葛根芩连片中14个特征性成分的HPLC含量测定方法,并测定11家生产企业的葛根芩连片含量。方法:采用Inertsil ODS-3（250 mm×4.6 mm,5μm）反相高效液相色谱柱,以乙腈-0.02 mol·L-1醋酸铵+0.03%三乙胺溶液（用冰醋酸调pH4.3）为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,葛根素、大豆苷、甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、大豆苷元、甘草酸铵、黄芩素8个成分检测波长250 nm,汉黄芩素检测波长280 nm,表小檗碱、盐酸药根碱、黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱5个成分检测波长346 nm。结果:葛根素、大豆苷、甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、表小檗碱、盐酸药根碱、黄连碱、大豆苷元、盐酸巴马汀、甘草酸铵、盐酸小檗碱、黄芩素、汉黄芩素进样量分别在146.265 850.24、24.13965.04、18.45738.00、79.183 167.32、9.57382.80、4.76190.40、2.57102.80、13.41536.40、10.60424.00、11.33453.22、12.08483.20、46.731869.25、20.28811.20、12.11484.50 ng范围内与峰面积呈良好线性关系（r>0.999 0）;平均加样回收率（n=6）分别为2.18%、1.79%、1.81%、1.68%、2.27%、2.13%、1.96%、1.07%、0.93%、0.61%、2.92%、0.77%、2.79%、0.62%;精密度、重复性、稳定性良好,RSD均小于3%。用该方法测定11家生产企业生产的16批葛根芩连片,除一批样品的汉黄芩苷未被检出外,其余企业14种成分均有检出,但含量存在差异。

四、结论

综述以上各个主要成份的含量测定方法，每个成份都可以通过高效液相色谱法测定，说明高效液相色谱法是目前中成药含量测定应用中最广泛、最有效的方法。薄层扫描法测定葛根芩连片中葛根素的含量，间接竞争ELISA法测定不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量，反相高效液相色谱法测定葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量、HPLC法测定葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量，这些方法都准确、简便、快速,可用于葛根芩连片的质量控制。 但目前为止还没有对葛根芩连片中的甘草进行含量测定，希望能尽快研究出对甘草含量测定的具体方法，能让葛根芩连片的整体质量得到更好的控制。

参考文献：

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[4]刘姝晨,屈保平,孔慧,单文超,成金俊,曾文浩,屈会化,王庆国,赵琰.间接竞争ELISA法测定不同厂家葛根芩连片中黄芩苷的含量[J].北京中医药大学学报,2016,3901:51-54.

[5]王小龙.高效液相色谱法测定葛根芩连片中黄芩苷的含量[J].时珍国医国药,2004(04):197.

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[9]李丽莉,吕轶峰,朱雪妍.葛根芩连片多成分含量测定的研究[J].药物分析杂志,2017,37(09):1607-1614.