葛根芩连片的含量测定研究进展 (3)(二)

王海鸣，王志红建立高效液相色谱测定葛根芩连片中葛根素含量的方法［4］以体积分数 50% 的甲醇为提取液对样品超声提取 20 min，采用 DiamonsilTMC18 (250 mm×4.6 mm ，5μm) 色谱柱，以甲醇 – 乙腈 – 水 ( 体积比 8∶12∶80) 为流动相，流速为 1.0 mL／min，检测波长为 250 nm，柱温为 30.0℃，进样量体积 10 μL。在最佳实验条件下，葛根素与其它物质能完全分离，葛根素的质量浓度在 5.43～543.2 μg／mL 范围内与色谱峰面积呈良好的线性，线性相关系数r=0.999 9，方法检出限为3.50 μg／mL (S／N=3)。方法加标回收率为100.0%，测定结果的相对标准偏差为1.6% (n=6)。该方法简单、快速、重现性好，适用于葛根芩连片中葛根素的测定。采用超声提取 – 高效液相色谱法测定葛根芩连片中有效成分葛根素含量，优选了提取溶剂和提取时间，该法具有快速简便、稳定性好、结果精确高的特点，可作为葛根制剂质量控制的方法。

（二）葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量测定方法

盐酸小檗碱CAS：633-65-8分子式：C20H18CLNO4·2H2O分子量：336含量：98%外观：浅黄色结晶粉末质量标准：中国药典2015年版二部用途：主要用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染、眼结膜炎、化脓性中耳炎等有效。还发现本品有阻断 α-受体，抗心律失常作用。

吴永芹 秦婷　秦峰 李宁 李发美采用立 HPLC 法测定葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量［5］方法 色谱柱:Diamonsil C18 , 流动相:乙腈-5mmol · L-1 十二烷基硫酸钠溶液 (冰乙酸调 pH 4.0)(52 ∶48), 流速:1.0mL · min-1, 检测波长:348nm 。结果 盐酸小檗碱在 0.1008 ～ 2.52μg 范围内线性关系良好 (r =1.000);平均加样回收率 (n=9)为 101.2 %。结论 本方法准确 、 简便、 快速 , 可用于葛根芩连片的质量控制。

江汉美　叶代望　熊维利等建立RP-HPLC法测定 葛根芩连片中盐酸小檗碱含量的方法。［6］方法采用反相高效液相色谱法,用AgilentZORBAX SB-C18柱(4.6×250mm,5μm),以乙腈-0.05mol/L三乙胺溶液(用磷酸调节pH至3.0)(25∶75)为流动相,流速为 1.0mL/min,检测波长为347nm,柱温为室温。结果 RP-HPLC法测定方中盐酸小檗碱的含量在0.16-0.80μg范围内线形关系良好,r=0.9993,平均加样回收率为 97.0%,RSD=1.3%。结论本法简便,准确,重现性好,可用于葛根芩连片的质量控制。

（三）葛根芩连片中黄芩苷的含量测定方法

黄芩苷（Baicalin）是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物,具有显著的生物活性，具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，并且具有较强的抗癌反应等生理效能。在临床医学已占有重要地位。

吴永芹 冯凯 周慧等采用高效液相色谱法。［7］其测定方法如下：使用Ultimate LP-C18色谱柱；流动相:甲醇-1％冰醋酸溶液；检测波长20～45min,278nm；流速:1.0mL?min- 1；柱温:35℃. 结果黄芩苷在0.02052～0.4104μg(r=0.99999)范围内,线性 关系良好;黄芩苷平均回收率：99.41％,RSD=1.9％.结论 本法专属性强、准确度高,可作为葛根芩连片质量控制的方法。

由于黄芩苷和汉黄芩苷的水解产物为黄芩素、汉黄芩素，故应以 4 个成分的总量来控制黄芩的质量。从各厂家的数据发现，黄芩中所含的成分各厂家差异显著，以黄芩中的主要成分黄芩苷为例：含量最高的为 26.56 mg·g-1（F 厂，批号 130928），含量最低的仅为 0.80 mg·g-1（G 厂）相差 30 倍，黄芩的其他成分黄芩素、汉黄芩素和汉黄芩苷各样品之间差异也十分显著。究其原因，除制剂过程中工艺控制的差异导致各企业产品差异外，也有可能为投料的差异所致。传统认为河南承德是黄芩的道地产地，现今内蒙、山西、吉林、云南、四川等均有黄芩出产。据文献报道［8-9］地的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等有效成分差异显著，野生黄芩与栽培黄芩有效成分也各有高低，为了更好地控制药品的质量，保证药品的安全有效，建议加强对葛根芩连片中黄芩的含量控制。

三、结论

综述以上各主要成分的含量测定方法，每个成分都采用高效液相色谱法，说明高效液相色谱法是目前中成药干粮测定应用最广泛、最有效的的方法，该法具有样品预处理简便，欲测成分得以分离而单独测定之，测定结果准确，灵敏度高，分析效率高等优点。随着具备梯度洗脱和二极管阵列检测器的液相色谱仪的普及，为多组分同时测定创造条件，开辟中成药中有效成分检测的新方法。但在多组分同时测定过程中，应考虑以下几个方面因素：一是取样量的合理范围，一般中成药处方中各被检测成分的含量相差较大。二是溶剂和流动相的选择，各欲测成分性质不同，要用同一溶剂溶解或同一系统测定，不一定能兼顾。三是药材的特征成分含量一般较低。四是被测成分的检测波长的选择问题。五是仪器对各被测成分的响应值不同等因素。

四、参考文献

［1］中国人民共和国药典2015年版

［2］宋金荣  扫描法测定葛根芩连片中葛根素的含量：1006-4931（2003）07-0035-01

［3］谭生建 邱夏  李光慧  赵炳成  梁玉琴RP-HPLC测定葛根荃连片中葛根素的含量 学实践杂志1996年 第14卷第5期（100101）

［4］王海鸣，王志红 效液相色谱测定葛根芩连片中葛根素（510656）第23卷第4期

［5］吴永芹 秦婷　秦峰 李宁 李发美HPLC 法测定葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量（110016）中国药事 2010 年第 24 卷第 4 期

［6］ 叶代望　熊维利等反相高效液相色谱法测定葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量《湖北中医药大学学报》2011年13卷1期 30-31页430065

［7］吴永芹 冯凯 周慧 赵新静 李发美HPLC法同时测定葛根芩连片中葛根素和黄芩苷的含量 （272025）中国药事2012年第26卷

［8］李丽莉，吕轶峰，朱雪妍葛根芩连片多成分含量测定的研究0254-1793（2017）09-1607-08（530021）

［9］建红．不同产地黄芩中的有效成分含量分析［J］．海峡药学，

2009，21（3）：57